全基因组鸟枪法

原理

对某基因组文库全部克隆片段进行末端序列测定中未测到的碱基数，即缺口（gap），与已测定的总碱基数相关。随着已测定碱基数的增加，缺口的总碱基数目会按照泊松公式的一个推论（P=e）迅速减小。其中P为基因组中某个碱基未被测定的概率，m为所测定的碱基数与基因组大小相比的倍数。m越大P值越小。当m=5（即随机测定的碱基数达到基因组的5倍）时，基因组中未测定的碱基数为总碱基数的0.67%（e=0.0067）。

对流感嗜血杆菌基因组（1.83Mb）来说，可能留有128个平均长为100bp的缺口。

具体过程

1.利用非特异DNA酶随机切断DNA，建立高度随机，大小为1kb~2kb的基因文库；

2.进行高效，大规模的单末端测序和双末端测序；

3.对测序结果进行序列拼接并排除连锁匹配的错误；

4.构建λ文库进行缺口填补，得到完整基因序列。

缺点

随着所测基因组总量增大，所需测序的片段大量增加，各个片段重叠成一个连续体的概率是2n~2n。

改进

1、大片段克隆法（clone contig）。首先用稀有内切酶把待测基因组降解为数百kb以上的片段，再分别测序。

2、靶标鸟枪法（directed shotgun）。首先根据染色体上已知基因和标记的位置来确定部分DNA片段的相对位置，再逐步缩小各片段之间的缺口。

该页面最新编辑时间为 2023年8月9日